酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基之：
選擇性氨基酸混合物（Dropout Supplement, DO Supplement）
(單缺，雙缺，三缺，四缺)
背景描述：
酵母菌的質(zhì)粒篩選通常基于營(yíng)養(yǎng)缺陷型突變菌株的使用而開展，這些菌株在缺乏某種特定培養(yǎng)基組分（比如氨基酸，嘌呤或嘧啶）的情況下無法生長(zhǎng)。當(dāng)轉(zhuǎn)化含有突變基因的質(zhì)粒后使得陽性轉(zhuǎn)化克隆能夠在缺乏必需營(yíng)養(yǎng)組分的培養(yǎng)基內(nèi)生長(zhǎng)，正因如此，省卻成分培養(yǎng)基添加劑/選擇性氨基酸混合物（DO medium supplements）能用來篩選成功轉(zhuǎn)化的酵母培養(yǎng)物。
選擇性氨基酸混合物/氨基酸缺失混合物（DO medium supplements）同義名：
Yeast Media, Amino Acid Dropout Mixes
Yeast Synthetic Drop-out Medium Supplements
Complete Supplement Mixture (CSM)
Amino Acid Supplement (Drop-Out Mixture)
酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基：
酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基（Synthetic Dropout Media, SD Media）多用來營(yíng)養(yǎng)缺陷型標(biāo)記基因的篩選和酵母轉(zhuǎn)化。這類培養(yǎng)基的配制根據(jù)商業(yè)化產(chǎn)品的區(qū)別有兩種方式。
*種方式：無氨基酸酵母氮源基礎(chǔ)+葡萄糖+選擇性氨基酸混合物（YNB without amino acids + glucose+ DO Supplement）
第二種方式：酵母基本培養(yǎng)基SD Base+選擇性氨基酸混合物（Yeast Minimal Base——SD Base + DO Supplement）
- 商業(yè)化SD Base與YNB的差別在于前者已添加葡萄糖。
- 有研究顯示，葡萄糖與氨基酸一起高壓滅菌會(huì)發(fā)生化學(xué)反應(yīng)，培養(yǎng)基會(huì)變色，由淺黃到深褐色不等，可能對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)產(chǎn)生一些影響，但一般情況下不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)。因此，很多實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過驗(yàn)證或通過對(duì)自身實(shí)驗(yàn)體系的評(píng)估，還是傾向用【第二種方式】來配制選擇性缺陷*培養(yǎng)基。
- 我司（懋康生物）建議客戶根據(jù)自身需求來選擇產(chǎn)品和配制培養(yǎng)基。
酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基工作原理：
特異的酵母營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基用于選擇培養(yǎng)含特異載體的酵母或雜交篩選。其工作原理如下（以基于Matchmarker GAL4-based two hybrid assay系統(tǒng)用到的載體為例）：
誘餌載體（pGBKT7-Bait）含合成色氨酸（Trp）的基因，誘捕載體（pGADT7-Prey）含合成亮氨酸（Leu）的基因。前者的親代酵母菌株（如Y2HGold）本身不含Trp基因，在Trp缺失的培養(yǎng)基上無法生長(zhǎng)。當(dāng)誘餌載體（pGBKT7-Bait）成功轉(zhuǎn)入Y2HGold，其在Trp缺失的培養(yǎng)基【即SD-Trp單缺培養(yǎng)基】上就能正常生長(zhǎng)。同理，后者的親代酵母菌株（如Y187）本身不含Leu基因，在Leu缺失的培養(yǎng)基上無法生長(zhǎng)。但當(dāng)誘捕載體（pGADT7-Prey）成功轉(zhuǎn)入Y187，其在Leu缺失的培養(yǎng)基【即SD-Leu單缺培養(yǎng)基】上能正常生長(zhǎng)。
選擇性氨基酸混合物（DO medium supplements）類別和應(yīng)用：
不管是*種方式還是第二種方式配制的酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷型培養(yǎng)基（SD Media）配制的關(guān)鍵在于選擇合適的選擇性/缺陷型氨基酸混合物（DO supplement）來配制特定的培養(yǎng)基，從而滿足特定的需求。如何選擇合適的選擇性氨基酸混合物，見表1。
根據(jù)氨基酸缺失數(shù)目分為單缺氨基酸混合物（Single Dropout Supplements，SDO），雙缺氨基酸混合物（Double Dropout Supplements，DDO），以此類推。
主要應(yīng)用：
- 營(yíng)養(yǎng)缺陷型表型的確認(rèn)
- 酵母轉(zhuǎn)化陽性菌株的篩選
- 酵母雙雜交篩選
- 酵母單雜交選擇
表1. 選擇性氨基酸混合物（DO medium supplements）類別和應(yīng)用 | ||||
類型 | 應(yīng)用 | 名稱 | MKbio編號(hào) | Clontech編號(hào) |
SDO（Single Dropout Supplements）（單缺） | 外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化 | DO Supplement -His | MS6316-10G | 630415 |
DO Supplement -Leu | MS6317-10G | 630414 | ||
DO Supplement -Trp | MS6318-10G | 630413 | ||
DO Supplement -Ura | MS6319-10G | 630416 | ||
DDO（Double Dropout Supplements） 配制酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基的氨基酸混合物（雙缺） | 外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)初始質(zhì)粒轉(zhuǎn)化免疫共沉淀、Y187和AH109酵母交配實(shí)驗(yàn)、接合型二倍體篩選 | DO Supplement -His/-Leu | MS6320-10G | 630418 |
DO Supplement -His/-Ura | MS6321-10G | 630422 | ||
DO Supplement -Leu/-Trp | MS6322-10G | 630417 | ||
DO Supplement -Met/-Trp | MS6323-10G | 630431 | ||
DO Supplement -Trp/-Ura | MS6324-10G | 630427 | ||
DO Supplement -Trp/-His | MS6325-10G | / | ||
DO Supplement -Ura/-Leu | MS6326-10G | / | ||
TDO（Triple Dropout Supplements） 配制酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基的氨基酸混合物（三缺） | 外源基因在酵母中的表達(dá)、異源基因功能互補(bǔ)、酵母單雜交系統(tǒng)和酵母雙雜交系統(tǒng)報(bào)告基因檢測(cè)、Y187和AH109酵母交配實(shí)驗(yàn)后報(bào)告基因分析（His3，Ade2） | DO Supplement -His/-Leu/-Trp | MS6331-10G | 630419 |
DO Supplement -His/-Leu/-Ura | MS6332-10G | 630423 | ||
DO Supplement -His/-Trp/-Ura | MS6333-10G | 630424 | ||
DO Supplement -Leu/-Met/-Trp | MS6334-10G | 630430 | ||
DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura | MS6335-10G | 630426 | ||
QDO（Quadruple Dropout Supplements） 配制酵母選擇營(yíng)養(yǎng)缺陷培養(yǎng)基的氨基酸混合物（四缺） | 酵母雙雜交系統(tǒng)和酵母三雜交系統(tǒng)報(bào)告基因檢測(cè)、Y187和AH109酵母交配實(shí)驗(yàn)后報(bào)告基因分析（His3,Ade2） | DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp | MS6341-10G | 630428 |
DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp | MS6342-10G | 630429 | ||
DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura | MS6343-10G | 630425 | ||
選擇性氨基酸混合物（DO medium supplements）訂購信息：現(xiàn)貨供應(yīng)，性價(jià)比高，。
品牌 | 名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | 對(duì)應(yīng)Clontech |
MKbio | DO Supplement -His | MS6316-10G | 10g | 418 | 630415 |
MKbio | DO Supplement -Leu | MS6317-10G | 10g | 418 | 630414 |
MKbio | DO Supplement -Trp | MS6318-10G | 10g | 418 | 630413 |
MKbio | DO Supplement -Ura | MS6319-10G | 10g | 418 | 630416 |
MKbio | DO Supplement -His/-Leu | MS6320-10G | 10g | 418 | 630418 |
MKbio | DO Supplement -His/-Ura | MS6321-10G | 10g | 418 | 630422 |
MKbio | DO Supplement -Leu/-Trp | MS6322-10G | 10g | 418 | 630417 |
MKbio | DO Supplement -Met/-Trp | MS6323-10G | 10g | 418 | 630431 |
MKbio | DO Supplement -Trp/-Ura | MS6324-10G | 10g | 418 | 630427 |
MKbio | DO Supplement -Trp/-His | MS6325-10G | 10g | 418 | / |
MKbio | DO Supplement -Ura/-Leu | MS6326-10G | 10g | 418 | / |
MKbio | DO Supplement -His/-Leu/-Trp | MS6331-10G | 10g | 418 | 630419 |
MKbio | DO Supplement -His/-Leu/-Ura | MS6332-10G | 10g | 418 | 630423 |
MKbio | DO Supplement -His/-Trp/-Ura | MS6333-10G | 10g | 418 | 630424 |
MKbio | DO Supplement -Leu/-Met/-Trp | MS6334-10G | 10g | 418 | 630430 |
MKbio | DO Supplement -Leu/-Trp/-Ura | MS6335-10G | 10g | 418 | 630426 |
MKbio | DO Supplement -Ade/-His/-Leu/-Trp | MS6341-10G | 10g | 418 | 630428 |
MKbio | DO Supplement -His/-Leu/-Met/-Trp | MS6342-10G | 10g | 418 | 630429 |
MKbio | DO Supplement -His/-Leu/-Trp/-Ura | MS6343-10G | 10g | 418 | 630425 |
【重要消息】：
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相關(guān)產(chǎn)品：產(chǎn)品具體信息。
品牌 | 名稱 | 貨號(hào) | 規(guī)格 | 價(jià)格（元） | 對(duì)應(yīng)Clontech |
MKbio | YPD Agar Medium | MS6301-350G | 350g | 550 | 630410 |
MKbio | YPD Medium | MS6302-250G | 250g | 438 | 630409 |
MKbio | YPDA Agar Medium | MS6303-350G | 350g | 550 | 630465 |
MKbio | YPDA Medium | MS6304-250G | 250g | 438 | 630464 |
MKbio | YNB Without Amino Acids | MS6305-100G | 100g | 330 | 291940（Difco） |
MKbio | YNB Without Amino Acids | MS6305-500G | 500g | 1450 | 291940（Difco） |
MKbio | Minimal SD Agar Base | MS6311-467G | 467g | 1428 | 630412 |
MKbio | Minimal SD Base | MS6312-267G | 267g | 768 | 630411 |
MKbio | Minimal SD Agar Base Gal/Raf | MS6313-270G | 270g | 1428 | 630421 |
MKbio | Minimal SD Base Gal/Raf | MS6314-185G | 185g | 988 | 630420 |
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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗(yàn)室消耗品與實(shí)驗(yàn)服務(wù)工作，主要從事細(xì)胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠(chéng)為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅(jiān)持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶提供產(chǎn)品。