• X-α-Gal（α-半乳糖苷酶顯色底物/酵母雙雜交檢測）

• — 酵母雙雜交檢測系統(tǒng)/蛋白-蛋白相互作用分析

搜索關(guān)鍵詞：X-α-Gal 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；α-半乳糖苷酶 a-galactosidase；MEL1基因；GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)；藍(lán)白斑篩選；CAS：107021-38-5；

基本描述：

X-α-Gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷，CAS：107021-38-5），一種用來檢測α-半乳糖苷酶（也稱為蜜二糖酶，α-D-半乳糖苷半乳糖水解酶，EC 3.2.1.22）活性的顯色底物。X-α-Gal的使用，避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實(shí)驗(yàn)（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍(lán)色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。X-α-Gal可用來區(qū)分腸桿菌科內(nèi)的不同物種以及劃分乳酸菌和雙歧桿菌。組織學(xué)研究中，X-α-Gal還可借助光學(xué)顯微鏡來檢測組織的α-半乳糖苷酶活性。

利用α-半乳糖苷酶水解二糖-蜜二糖作為碳源，酵母菌得以正常生長或進(jìn)行發(fā)酵。釀酒酵母菌內(nèi)，該酶由幾種GAL基因調(diào)控的MEL1基因所編碼。一旦GAL4激活，α-半乳糖苷酶分泌，之后水解培養(yǎng)基上的X-α-Gal，使得菌落產(chǎn)生藍(lán)斑。酵母雙雜交研究用的工程菌包括AH109，PJ69-2A，Y190和Y187。

X-α-Gal優(yōu)勢：

避開雙雜交分析中β-半乳糖苷酶溶液制備和濾膜提升實(shí)驗(yàn)（filter-lift assay）的繁瑣操作，只需直接添加在培養(yǎng)基上，通過藍(lán)色沉淀的生成與否，即可用來檢測雙雜交相互作用。

X-α-Gal與酵母雙雜交系統(tǒng)：

酵母雙雜交篩選是體內(nèi)用來檢測蛋白-蛋白相互作用的一種遺傳分析實(shí)驗(yàn)，此方法由Prof. Stan Fields及合作者開發(fā)用來調(diào)查兩個(gè)已知蛋白的相互作用，另一個(gè)重要應(yīng)用是從文庫內(nèi)篩選并鑒定某一特定蛋白的未知結(jié)合蛋白。陽性克隆也就是那些能夠激活報(bào)告基因轉(zhuǎn)錄子，使得營養(yǎng)缺陷型酵母雙雜交菌株在營養(yǎng)缺陷選擇性培養(yǎng)基上生長的菌落。大多數(shù)雙雜交方法使用大腸桿菌的LacZ基因作為第二個(gè)報(bào)告基因，通常要使用非常耗時(shí)的filter-lift assay來鑒定能在第二種選擇性平板上生長的菌落。而替換使用的X-α-Gal，可直接在營養(yǎng)缺陷性的選擇培養(yǎng)基上來檢測基于GAL4-轉(zhuǎn)錄子的雙雜交作用。

基本特性：

1）CAS NO：107021-38-5

2）化學(xué)名：5-Bromo-4-chloro-3-indoxyl-α-D-galactopyranoside 5-溴-4-氯-3-吲哚-α-D-吡喃半乳糖苷；X-α-D-Galactoside X-α-D-半乳糖苷；

3）分子式：C₁₄H₁₅BrClNO₆

4）   分子量：408.64g/mol

5）   純度：≥98%（TLC）

6）   外觀：白色或近白色結(jié)晶粉末

7）   化學(xué)結(jié)構(gòu)：

使用方法【懋康整理，詳見】

方法1：直接倒入固體培養(yǎng)基

方法2：涂布于預(yù)制培養(yǎng)平板上

— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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