Nitrocefin 頭孢硝噻吩保存與運(yùn)輸方法

　　保存：-20°C避光保存，儲(chǔ)存于惰性氣體下。至少2年穩(wěn)定。

　　運(yùn)輸：冰袋運(yùn)輸。

　　使用方法

　　1. 頭孢硝噻吩儲(chǔ)存液(10mg/ml)制備

　　a)使用前從冰箱內(nèi)取出產(chǎn)品置于室溫回溫至少20min并進(jìn)行低速離心;b)吸取100μl高質(zhì)量DMSO加入1mg頭孢硝噻吩，充分溶解并混勻。可按照單次用量分裝后，-20°C避光保存。

　　2. 頭孢硝噻吩工作液(1mg/ml)制備

　　頭孢硝噻吩的典型工作濃度為0.5-1.0mg/ml，此制備物一般呈黃色。

　　取20μl頭孢硝噻吩(10mg/ml)儲(chǔ)存液加入180μl

　　PBS緩沖液(0.1M，中性pH)，混勻后，即得到頭孢硝噻吩(1mg/ml)工作液。多余的工作液可置于-20°C避光保存，必須在2周用完。

　　3. 快速檢測(cè)分析

　　一旦接觸β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)生菌，待檢樣本一般可快速產(chǎn)生陽性反應(yīng)。通常建議20-30min的反應(yīng)時(shí)間，同時(shí)設(shè)置陰性對(duì)照。

　　3.1 玻片表面分析法

　　a)吸取一滴頭孢硝噻吩工作液(1mg/ml)到干凈的玻璃載玻片表面;b)使用無菌接種環(huán)挑取一固體培養(yǎng)克隆，并與液滴混勻;c)若20-30min內(nèi)能觀察到紅色，表明β-內(nèi)酰胺酶活性。【若有必要，可多滴頭孢硝噻吩工作液，防止干燥】

　　3.2 直接接觸分析法

　　a)直接吸取一滴頭孢硝噻吩工作液(1mg/ml)到分離菌落表面;b)若20-30min內(nèi)能觀察到紅色，表明β-內(nèi)酰胺酶活性。

　　3.3 肉湯培養(yǎng)液分析法

　　a)取1ml肉湯培養(yǎng)液，加入3-5滴頭孢硝噻吩工作液(1mg/ml);b)若20-30min內(nèi)能觀察到紅色，表明β-內(nèi)酰胺酶活性。

　　3.4 細(xì)胞裂解液分析法

　　a)超聲裂解1ml細(xì)胞懸液;b)加入3-5滴頭孢硝噻吩工作液(1mg/ml)到裂解懸液;b)若20-30min內(nèi)能觀察到紅色，表明β-內(nèi)酰胺酶活性。

　　3.5 濾紙分析法

　　a)將一小片濾紙片(~3 x 3 cm)飽和吸收頭孢硝噻吩工作液(1mg/ml)，然后置于干凈的培養(yǎng)皿內(nèi);b)跳取一分離的克隆，并涂抹到浸漬濾紙片上;c)若20-30min內(nèi)能觀察到紅色，表明β-內(nèi)酰胺酶活性。

　　注意事項(xiàng)

　　為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

Nitrocefin 頭孢硝噻吩簡(jiǎn)介

頭孢硝噻吩(Nitrocefin，CAS NO：41906-86-9)，具有顯色特性的一種頭孢菌素(cephalosporin)，通常用來檢測(cè)由β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥菌代謝產(chǎn)生的β-內(nèi)酰胺酶(beta-lactamases)活性。作用機(jī)制在于：幾乎所有β-內(nèi)酰胺酶能水解頭孢硝噻吩β-內(nèi)酰胺環(huán)上羰基碳和氮基間的酰胺鍵，這一過程通過顏色的變化可用肉眼來判斷。

產(chǎn)品特性

　　1. CAS NO：41906-86-9

　　2. 化學(xué)名：(6R)-3-[(1E)-2-(2,4-dinitrophenyl)ethenyl]-8-oxo-7R-[(2-thienylacetyl)amino]-5-thia-1-azabicyclo

　　[4.2.0]oct-2-ene-2-carboxylic acid

　　3. 同義名：Nitrocephin

　　4. 分子式：C21H16N4O8S2

　　5. 分子量：516.51

　　6. 純度：≥95%(HPLC)

　　7. 外觀：橘色粉末

　　8. 溶解性：DMSO(30 mg/ml)、DMF(30 mg/ml)