Y190 Chemically Competent Cell

酵母菌化學感受態(tài)細胞

溫馨提示

見我司（懋康生物）整理的酵母雙雜交（Yeast two-hybrid assay）產品專題。

產品關鍵詞：

Y190-GAL4酵母單雜交系統(tǒng)；Y1HGold；pGBKT7；pGADT7；Ar Qual；X-α-Gal；Aureobasidin A （AbA）；金擔子素；

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產品組分：

產品描述

Y190是GAL4系統(tǒng)酵母雙雜交用實驗菌株，MATa型，能直接轉化質?；蚺cMATα型酵母菌株Y187通過接合（mating）操作進行蛋白相互作用驗證或篩庫實驗。轉化標志為trp1，leu2，cyh2。報告基因為lacZ，HIS3，MEL1。Y190-GAL4酵母雙雜交系統(tǒng)需要兩種質粒配套使用，pGB&pACT2或pGBKT7& pGADT7。pGB由或pGBKT7改造而來，篩選標志為Trp，用于表達DNA-BD與誘餌蛋白（bait）的融合蛋白；pACT2和pGADT7的結構和功能類似，篩選標志為Leu，用于表達AD與誘捕蛋白（prey）的融合蛋白。

本品為經特殊工藝制備的Y190酵母菌化學感受態(tài)細胞，用pGADT7質粒檢測轉化效率＞10⁴cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存三個月。

基因型

MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, leu2-3, 112, gal4Δ, gal80Δ, cyh^r2, LYS2 : : GAL1 _UAS-HIS3_TATA^-HIS3, MEL1 URA3 : : GAL1_UAS-GAL1_TATA-lacZ

注意事項

1. 號在冰上融化感受態(tài)細胞。

2. 轉化高濃度質?？上鄳獪p少用于涂板的菌量。同時轉化2-3種質粒可適當增加質粒的用量。

3. Y190對高溫敏感，適生長溫度為27-30℃，一旦高于31℃，生長速度和轉化率都呈指數(shù)下降。

4. 菌落變粉紅色并不是污染，而是酵母細胞生長中的一種常見現(xiàn)象。當酵母細胞在平板上培養(yǎng)幾天，將平板內的腺嘌呤消耗殆盡，那時酵母試圖通過自身代謝途徑合成腺嘌呤以供利用。然而，某些菌株ADE2基因被破壞，腺嘌呤合成受阻。且ADE4，5，6，7，8基因均正常。由此，造成中間產物P-ribosylamino imidazole（AIR）在細胞的積累使得菌落變?yōu)榉奂t色。

5. 酵母菌在缺陷培養(yǎng)基上生長速度比YPDA培養(yǎng)基慢，營養(yǎng)缺陷成分越多，生長越慢，以轉化涂板為例：涂YPDA平板于29℃，48h培養(yǎng)可見直徑1mm克?。煌?/span>SD單缺平板于29℃，48-60h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD雙缺平板于29℃，60-80h培養(yǎng)可見直徑1mm克隆；涂SD三缺或四缺平板于29℃，80-90h培養(yǎng)可見直徑1mm克??；

6. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. Carrier DNA于使用前通過加熱處理使其變性為單鏈狀態(tài)，方法如下：95-100℃ 水浴或金屬浴3min，快速插入冰中，靜置3min。重復一次。

2. 取100 µl冰上融化的Y190化學感受態(tài)細胞，依次加入預冷的目的質粒0.5-3 µg，單鏈Carrier DNA 10 µl，PEG/LiAc 500µl，用槍吹打幾次充分混勻，30℃水浴30 min（在15min時翻轉6-8次混勻）。

3. 之后將管子放42℃水浴15 min（在7.5min時翻轉6-8次混勻）。

4. 5000 rpm離心40s棄上清，用400 µl ddH₂O重懸沉淀，離心30s棄上清。

5. 用50 µl ddH₂O重懸，涂板，放入29℃培養(yǎng)48-96 h。

— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優(yōu)質產品。

Y190酵母化學感受態(tài)細胞

Y190酵母化學感受態(tài)細胞