JC-1 線粒體膜電位熒光探針

溫馨提示：見我司整理線粒體熒光探針產(chǎn)品專題。

產(chǎn)品標(biāo)簽

Rhodamine 123 羅丹明123；JC-1；JC-10；CCCP；CAS：62669-70-9

產(chǎn)品信息

【溫馨提示1】：我司懋康生物提供JC-1線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒（MX3204-100T），含實(shí)驗(yàn)所需的緩沖液和陽(yáng)性對(duì)照，使用更方便，結(jié)果更直觀。

【溫馨提示2】：我司懋康生物提供JC-1的升級(jí)產(chǎn)品JC-10（MX3206-1MG，MX3207-100T），后者具有更好的水溶性，能更好的加載進(jìn)入細(xì)胞，結(jié)果更準(zhǔn)確。

產(chǎn)品描述

JC-1 是一種廣泛用于檢測(cè)線粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢(shì)依賴性的方式積聚在線粒體內(nèi)，可以用來(lái)檢測(cè)細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。正常線粒體內(nèi)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強(qiáng)烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測(cè)，因顏色的變化可以非常直接的反映出線粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測(cè)，因線粒體的去極化程度可以通過(guò)紅/綠熒光強(qiáng)度的比例來(lái)衡量。觀察時(shí)，只需使用常規(guī)的觀察紅色熒光和綠色熒光的設(shè)置即可。

本品以凍干粉形式提供，CAS NO. 3520-43-2 ，細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)。用于檢測(cè)細(xì)胞的線粒體膜電位時(shí)常用的濃度范圍為1～20 µg/ml，對(duì)于很多細(xì)胞適宜采用的工作濃度為10 µg/ml。

產(chǎn)品特性

1） CAS NO：3520-43-2

2） 化學(xué)名：5,5‘,6,6’-Tetrachloro-1,1‘,3,3’-tetraethylbenzimidazolylcarbocyanine iodide

3） 分子式：C₂₅H₂₇Cl₄IN₄

4） 分子量：652.23 g/mol

5） 純度：＞95%（HPLC）

6） 外觀：紅褐色粉末

7） 溶解性：溶于DMSO、DMF，幾乎不溶于水

8） Ex/Em：單體形式（monomer form）：Ex=514 nm, Em=529 nm；

聚合物形式（J-aggregate form）：Ex=585 nm, Em=590 nm；

注意事項(xiàng)

• JC-1是光敏感性的，所有染色步驟的操作過(guò)程中避免強(qiáng)光接觸。

• JC-1染色完成后，立即進(jìn)行后續(xù)的結(jié)果分析非常必要；

3） 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

1. 染色工作液制備

1） JC-1儲(chǔ)存液制備：將JC-1粉末室溫回溫20min左右，直接加1ml 無(wú)水DMSO到5mg粉末，顛倒混勻

使其充分溶解后，即得到5mg/ml的儲(chǔ)存液。溶液?jiǎn)未斡昧糠盅b存于-20℃，避光干燥且避免反復(fù)凍融。

• JC-1工作液制備：將凍存的儲(chǔ)存液置于室溫充分融化，之后用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)基直接稀釋儲(chǔ)存液（5 mg/ml）到需要的工作濃度，邊震蕩邊稀釋，充分混勻。為了去除任何不溶顆粒，建議13,000 x g離心工作液1 min，小心吸取上清轉(zhuǎn)移到新的管子內(nèi)。整個(gè)過(guò)程要避光操作。

【注意】：因JC-1不溶于水，很可能在稀釋到工作液的過(guò)程中形成聚集顆粒，建議細(xì)胞染色前用離心或者過(guò)濾的方法去除這些顆粒后再使用。

• JC-1染色步驟（流式細(xì)胞儀）

數(shù)據(jù)分析：

含有紅色JC-1聚集物的健康細(xì)胞線粒體用FL2通道檢測(cè)；含有綠色JC-1單體的凋亡或不健康細(xì)胞用FL1（FITC）通道檢測(cè)。

• JC-1染色步驟（熒光顯微鏡）

A． 懸浮細(xì)胞

B． 貼壁細(xì)胞

• JC-1染色步驟（熒光酶標(biāo)儀）

1） -7）同上JC-1染色步驟（流式細(xì)胞儀）；

8） 用0.3 ml緩沖液重懸細(xì)胞；然后按照每孔0.1 ml的量將染色好的細(xì)胞轉(zhuǎn)移到黑色的96孔板內(nèi)，即可進(jìn)行熒光酶標(biāo)板分析?！?/span>注意】：請(qǐng)馬上進(jìn)行熒光顯微分析，此細(xì)節(jié)重要。

數(shù)據(jù)分析：

健康細(xì)胞，JC-1單體聚集形成聚合物，線粒體呈現(xiàn)強(qiáng)烈的紅色熒光（激發(fā)波長(zhǎng)550 nm，發(fā)射波長(zhǎng)600 nm）。而凋亡或壞死細(xì)胞內(nèi)JC-1以單體形式存在，線粒體呈強(qiáng)烈的綠色熒光（激發(fā)波長(zhǎng)485 nm, 發(fā)射波長(zhǎng)535nm）。之后計(jì)算紅色熒光信號(hào)與綠色熒光信號(hào)的比值，用來(lái)判斷細(xì)胞健康程度。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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JC-1  線粒體膜電位熒光探針 細(xì)胞增值

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