BCFL AM (Superior replacement for BCECF AM)

pH熒光探針

產(chǎn)品關(guān)鍵詞

BCFL AM; BCECF, AM；Dual-excitation ratiometric pH indicator 雙激發(fā)光比率型pH熒光探針；SBFI AM ( Na⁺ Indicator)；Fluo-8, AM； 

產(chǎn)品信息

產(chǎn)品描述

BCFL AM是一種細(xì)胞膜滲透性的熒光探針，用來測(cè)定相對(duì)的胞內(nèi)pH變化。是常用的比率型pH探針-BCECF（2',7'-Bis-(2-Carboxyethyl)-5-(and-6)- Carboxyfluorescein）的*替代物。與BCECF不同（至少由三種異構(gòu)體構(gòu)成的一種復(fù)合物，不同異構(gòu)體之間的比率因批次而異），BCFL是單一異構(gòu)體，具有更好的的結(jié)果重復(fù)性。BCFL具有與BCECF相同的光譜反應(yīng)（單波長(zhǎng)測(cè)定λex/λem=490/535nm；或比率測(cè)定λex/λem=505/ 535nm和λex/λem=430/535nm）（光譜特征見附錄I）。BCFL AM表現(xiàn)出pH依賴的雙激發(fā)性，pKa~7.0，以及一個(gè)激發(fā)交點(diǎn)（454nm）。BCFL AM的比率型成像使得胞內(nèi)pH測(cè)定基本不受幾種可變因素的影響，包括染料濃度、光徑、細(xì)胞泄露和光漂白率。

產(chǎn)品特性

1） 同義名：BCFL AM ester; BCFL Acetoxymethyl Ester;

2） 分子量：~600

3） 溶解性：溶于DMSO

4） Ex/Em：503/528nm

注意事項(xiàng)

1）熒光染料都存在淬滅問題，操作或保存過程中盡量避光，減緩熒光淬滅。

2）為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法

A、試劑準(zhǔn)備

1. 10% Pluronic F-127母液配制【可選】

a）將1g Pluronic F-127（貨號(hào)：MS4301-1G）溶于10ml去離子水，配制成10%（w/v）母液。

b）溶解過程中于40~50℃內(nèi)加熱10% Pluronic F-127母液30min，使其*溶解。

c）10% Pluronic F-127母液室溫保存，高達(dá)6個(gè)月穩(wěn)定，不要凍存。

2. HHBS Buffer（貨號(hào)：MS3510-500ML）或其他生理緩沖液

3. 丙磺舒（貨號(hào)：MZ8471-1G）或水溶性丙磺舒（貨號(hào)：MZ8472-154MG）【可選】

B、操作步驟

【注意】：以下實(shí)驗(yàn)步驟中用到非離子表面活性劑Pluronic F-127和有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑丙磺舒（Probenecid），這兩種試劑雖然都是非必需的，但強(qiáng)力推薦使用。

1. 制備BCFL AM母液：于實(shí)驗(yàn)前，將低溫保存的BCFL AM粉末（Mw：~600）置于室溫回溫至少20min。低速離心后加入高質(zhì)量無水DMSO配制成10~20mM母液。比如：1mg BCFL AM粉末加入166μl DMSO充分溶解，混勻后即得到10mM母液。多余的母液根據(jù)單次用量分裝，避光凍存，約3個(gè)月穩(wěn)定

2. 用HHBS或其他的生理緩沖液制備2×工作液（含10μM BCFL AM和0.08% Pluronic F-127），比如，在合適的管子內(nèi)混合6.4μl BCFL AM（10mM 儲(chǔ)存液）和51.2μl 10% Pluronic F-127。之后，添加HHBS或其他生理緩沖液直到總體積為6.4ml。

【注意】：對(duì)于大部分的細(xì)胞系，建議BCFL AM的工作濃度為4~5μM。Pluronic F-127的終濃度建議為0.02~0.04%。

3. 吸取100μl 2×工作液到含100μl 細(xì)胞培養(yǎng)基的培養(yǎng)孔內(nèi)，混勻，使得BCFL AM的終濃度為5μM和Pluronic F-127的終濃度為0.04%。

4. 置于37℃孵育30~60min。之后置于室溫孵育30min。

5. 吸走200μl染色液，之后重新加入含1mM丙磺舒的HHBS Buffer或其他生理緩沖液。

6. 添加化合物到檢測(cè)孔內(nèi)。之后通過熒光檢測(cè)來進(jìn)行pH分析?！締尾ㄩL(zhǎng)檢測(cè)：Ex/Em=490/535nm（cutoff=515nm）；或比率測(cè)定Ex/Em=505/535nm和430/535nm（cutoff=515nm）】

相關(guān)產(chǎn)品

附錄 BCFL探針pH依賴性的光譜特征。A）吸收光譜；B）發(fā)射光譜；C）激發(fā)光譜；圖A）表明BCFL在pH4.5-9.0范圍內(nèi)的吸收光譜往紅光遷移（450nm→505nm），且摩爾吸光系數(shù)增加到約90,000 cm^-1M^-1，反映了BCFL具pH敏感性的吸收特征。圖B）表明BCFL在生理pH6-8范圍內(nèi)的發(fā)射光譜。與BCECF相似，BCFL在生理范圍內(nèi)的發(fā)射波長(zhǎng)為526nm。圖C）說明BCFL作為雙激發(fā)比率型pH指示劑，具有激發(fā)等消光點(diǎn)（430nm）。

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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pH熒光探針

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