BL21 Star (DE3) Chemically Competent Cell

       大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞

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產(chǎn)品標(biāo)簽：

BL21 (DE3)；Rosetta (DE3)；Rosetta (DE3)；表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞；pET表達(dá)載體；IPTG誘導(dǎo)；

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【好消息】：見我司整理的BL21系列表達(dá)感受態(tài)細(xì)胞常見問題。

產(chǎn)品組分：

菌株描述

BL21 Star (DE3) 菌株來源于BL21(DE3)菌株，DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動子調(diào)控的T7 RNA聚合酶基因），IPTG用來誘導(dǎo)T7 RNA聚合酶的表達(dá)。該菌株攜帶一突變的rne基因（rne131），編碼合成截短的RNase E，此酶喪失mRNA降解能力從而提高mRNA轉(zhuǎn)錄體的穩(wěn)定性和增加蛋白產(chǎn)量。另外，BL21 Star (DE3)是大腸桿菌B/r菌株，缺乏lon和外膜蛋白酶OmpT，降低外源重組蛋白的被降解，進(jìn)一步增加了蛋白表達(dá)率。BL21 Star (DE3) 菌株特別設(shè)計適用于低拷貝，T7啟動子表達(dá)載體的非毒性蛋白的高水平表達(dá)。與BL21菌株相比， mRNA穩(wěn)定性提高，BL21 Star菌株由于提高的mRNA穩(wěn)定性，呈現(xiàn)出更高的異源基因基礎(chǔ)表達(dá)，因此不適合毒性蛋白表達(dá)。

BL21 Star (DE3) 菌株基因型：F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm rne131(DE3)

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌BL21 Star (DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細(xì)胞，可用于DNA的熱擊轉(zhuǎn)化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉(zhuǎn)化效率可達(dá)108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩(wěn)定保存幾個月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

保存與運(yùn)輸條件：

保存：-80℃保存，六個月有效。

運(yùn)輸：干冰運(yùn)輸。

注意事項(xiàng)

1）   感受態(tài)細(xì)胞必須用干冰運(yùn)輸。感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)在-80℃保存，不可反復(fù)凍融且放置時間過長，否則會減低感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。

2）   最hao在冰上融化感受態(tài)細(xì)胞。

3）   進(jìn)行轉(zhuǎn)化操作時，需在相應(yīng)溫度及無菌條件下進(jìn)行。

4）   為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可保留部分連接反應(yīng)液以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到zui低。

5）   產(chǎn)品包裝內(nèi)含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實(shí)驗(yàn)用。

6）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無菌條件的標(biāo)準(zhǔn)下進(jìn)行】

1）   取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無菌預(yù)冷的離心管內(nèi)，置于冰浴中。【注意：一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50-100 μl，可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用。需注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。】

以下實(shí)驗(yàn)以100 μl感受態(tài)細(xì)胞為例。

2）   向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA（根據(jù)實(shí)際情況加入適量的DNA，通常100 μl感受態(tài)細(xì)胞能夠被1 ng超螺旋質(zhì)粒DNA所飽和），用移液器輕輕吹打混勻（或用手輕彈管輕輕混勻），冰浴靜置30min。

3）   42℃熱激45s，迅速將離心管轉(zhuǎn)移到冰浴中，冰上靜置2-3min。此過程不要搖動離心管。

4）   向每個離心管中加700 μl無菌的SOC或LB培養(yǎng)基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養(yǎng)60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5）   根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求，取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞，加到含相應(yīng)抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養(yǎng)基上，用無菌的涂布棒將細(xì)胞均勻涂開，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養(yǎng)，37℃培養(yǎng)12-16h。

【注意】：

a）涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)調(diào)整。若轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300 μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。若預(yù)計的克隆較少，可通過離心（4,000 rpm，2min）后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。

b）新制備的固體培養(yǎng)基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養(yǎng)。c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權(quán)歸MKBio懋康所有】

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